2.根据NCBI提供的人的LGR6基因信息,利用在线设计软件设计合成多对LGR6的siRNA干扰序列及无意义的对照干扰片段,同时构建LGR6的过表达载体。将测序正确的LGR6过表达质粒进行转化并细菌涂板,挑选单克隆进行摇菌扩培,参照质粒抽提试剂说明书提取质粒。随后培养胃癌细胞株MGC-803和MKN-45细胞,采用LipofectamineTM 2000法对细胞进行转染,采用qRT-PBelinostatCR法和Western-blot方法检测转染后细胞中LGR6的表达变化。3.体外胃癌细胞株MGC-803和MKN-45中,进行细胞瞬时转染。实验分组设置为对照组(si-Ctrl),LGR6干扰组(si-LGR6)及LGR6干扰48hr后再转染LGR6过表达质粒(Rescue),采用MTT实验检测细胞的体外增殖能力改变,Annexin-V/PI流式双染色法检测细A-1331852DMSO溶解度胞凋亡率的改变。同时应用Materigel-transwell法检测细胞体外侵袭能力的改变,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的改变。4.在胃癌细胞MGC-803和MKN-45中,LGR6干扰或者干扰后进行LGR6过表达质粒回补,采用qRT-PCR及Western-blot法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax和Caspase-3)的基因和蛋白表达的变化,同时采用W确认细节estern blot法检测磷酸化的AKT/mTOR蛋白及总AKT/mTOR蛋白的表达变化,进一步明确LGR6参与调控胃癌发生发展的可能的分子机制。结果1.对胃癌组织及癌旁正常组织进行检测,结果提示,与胃癌癌旁正常组织比较,胃癌组织中LGR6的表达比癌旁正常组织中LGR6的表达显著增加。2.通过对LGR6的表达与胃癌患者的临床病理特征进行统计分析,结果提示,LGR6的表达水平差异与胃癌的病理分期、淋巴结转移及患者的五年生存时间显著相关。