至试验结束时,LS-2猪临床表现正常,剖检未见内脏器官外观异常,实时PCR于肺、心、骨髓、胸腺等可检出ASFV核酸,但病毒分离结果呈阴性。组织切片染色显示,LS-2猪脾脏和肾脏结构正常,仅肺脏中肺泡呈现轻微融合、扩张。以上结果表明,和普通家猪相比,LS-2猪对ASFV人工感染具有明显抗性,该类型猪具有重大推广意义。
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CRISPR/Cpf1是近年来新兴起的一种基因编辑系统,在各类动植物和微生物如酿酒酵母中被广泛应用,进行基因编辑和代谢工程改造。Cpf1核酸酶在宿主中作为基因“剪刀”发挥着重要的DNA编辑功能,因此,对于Cpf1核酸酶在生物体中的检测就显得至关重要。将Cpf1核酸酶N端166个氨基酸的DNAPX-478细胞系编码序列克隆至pET-28a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行重组表达,对诱导其表达的IPTG浓度和诱导时间开展条件优化,将利用6×His纯化标签得到的重组蛋白作为抗原进行动物免疫,间接ELISA方法测定免疫后抗血清效价达到128 000,并经Protein A纯化后得到抗体,Western SGC-CBP30核磁blotting分析抗体的特异性,结果显示可以特异性识别大肠杆菌中表达的Cpf1~((1-166))和Cpf1,为Cpf1在生物体中的检测提供工具,且将为推动CRISPR/Cpf1系统在生物体中的应用奠定良好的实验基础。
肺癌作为全球死亡率第一的疾病,常见的治疗方案有手术治疗、化疗、放疗,针对驱动基因阳性者还可以选择性使用靶向治疗,但肺癌患者5年生存率仍然较低。