方法本研究首先通过免疫组化技术检测了42对PC患者中ALKBH5表达水平,并分析ALKBH5表达与临床分期、病理分级和疾病预后的关系。随后分别设计gain-of-function和loss-of-function实验通过CCK-8、平板克隆、EDU染色、细胞划痕和Transwell等实验方法探讨ALKBH5对体外PC细胞增殖及侵袭能力的影响。裸鼠皮下移植瘤模型进一步揭示selleck激酶抑制剂了ALKBH5在PC体内生长过程中的作用。分别采用m RNA二代测序和Me RIP-seq技术对ALKBH5过表达PC细胞转录组表达谱进行分析,筛选m RNA表达谱测序中上调基因,以及Me RIP-seq中ALKBH5未处理组特异peak对应的基因,寻找ALKBH5潜在靶基因及信号通路。运用WB、q RT-PCR和Coip实验,研究ALKBH5Tozasertib临床试验对Per1/ATM/CHK2通路的影响。设计PER1表达回复实验,检测PER1对胰腺癌增殖和侵袭转移能力的影响。通过构建ALKBH5启动子双荧光素酶报告基因质粒并采用Chip实验验证ALKBH5启动子中的TP53结合位点。结果胰腺癌组织中m6A水平上升,ALKBH5表达降低,且ALKBH5表达与肿瘤侵袭性指标如病理分级、临床分期及血管侵袭均显著Selleck相关,生存分析结果显示ALKBH5低表达预示患者的预后不佳。RNA-seq测序(vs.对照组)发现ALKBH5过表达可引起胰腺癌Bx PC-3细胞转录组发生抗增殖促凋亡性变化;对表达上升的基因行GO term及信号通路分析结果显示细胞周期阻滞及凋亡相关分子通路大量富集,而细胞生长分裂信号则受到抑制;体外实验发现ALKBH5过表达可显著抑制胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,使细胞周期阻滞于G2/M期;而ALKBH5下调则引起相反作用。