方法将人神经纤维母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)分为3组:对照组、冈田酸(okadaic acid,OA)损伤模型组(40 nmol/L OA诱导12 h)和Leptin处理组。用OA诱导SH-SY5Y,建立阿尔茨海默病细胞模型。Leptin处理组是在模型组基础上,给予外源性leptin(0.4μg/ml)处理6 h,用Wesselleck screening librarytern Blot检测细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)和β-actin蛋白表达水平。瘦素受体(ObR)和Cdk5的共定位情况用双重免疫荧光染色检测。结果模型诱导成功后,Western Blot显示Cdk5表达明显升高(P<0.01);给予leptin后,Cdk5蛋白表达显著降低(P<0.01)。双selleck染法免疫荧光实验表明,SH-SY5Y细胞中ObR和Cdk5蛋白均主要在细胞质中表达,并且红色和绿色标记重叠为橙色荧光,可认为两种蛋白共定位,提示ObR和Cdk5之间可能存在相互作用。结论 Leptin能够在体外降低阿尔茨海默病相关的Cdk5表达,为其治疗提供了新靶点。”
“通过DNA甲基转移酶抑制剂Selleck5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞进行不同处理后,利用MTT比色法选定5-aza-dc的最适作用浓度和时间,用Hochest33342/PI双染和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,通过核型分析检测5-aza-dc对细胞染色体的影响。结果表明,低浓度的5-aza-dc(≤0.010μmol/L)作用72 h对细胞影响不大;随其浓度的增加,细胞形态、活率、凋亡及染色体都受到显著影响。