众所周知,胰腺癌早期临床表现不典型,容易造成误诊、漏诊,所以确诊时只有20%的患者有机会接受外科
研究背景和目的低氧微环境是胰腺癌的重要生物学特征,并与吉西他滨耐药密切相关。本论文针对低氧条件下胰腺癌吉西他滨耐药的分子机制进行研究,揭示miR-301a在低氧诱导胰腺癌吉西他滨耐药的作用和机制,为临床上逆转胰腺癌患者吉西他滨耐药提供新的思路。方法应用细胞毒性实验、流式细胞术及实分子量时定量PCR等技术研究低氧对胰腺癌细胞吉西他滨耐药及miR-301a表达的影响。通过过表达及敲除miR-301a研究其对胰腺癌吉西他滨耐药的作用。应用si RNA干扰技术和NF-κB p65过表达质粒研究NF-κB p65对miR-301a的调控机制。Western Blot技术研究低氧条件下胰腺癌细胞miR-301a对TAp63、PTEN、HIF-1α及Selleck Danusertibp-Akt的调控作用。结果(1)与常氧相比,低氧条件下胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性显著增强(P<0.05)。低氧条件下胰腺癌细胞miR-301a表达与常氧相比明显增高(P<0.05)。与阴性对照组相比,常氧和低氧条件下miR-301a过表达后胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性明显增强(P<0.05);与阴性对照组相比,常氧和低氧条件下敲除miR-301a后胰腺癌细胞selleck对吉西他滨耐药性明显降低(P<0.05)。(2)常氧下敲低NF-κB p65后miR-301a表达下降,过表达NF-κB p65后miR-301a表达升高(P<0.05);而在低氧条件下敲低和过表达NF-κB p65后miR-301a表达未见明显变化。(3)与常氧相比,低氧条件下胰腺癌细胞TAp63和PTEN蛋白表达显著降低。过表达miR-301a能下调TAp63和PTEN蛋白表达,并能促进p-Akt的活化和HIF-1α蛋白的累积。