【目的】在细菌染色体上构建第1类整合子反应模型，用于评价整合酶介导的基因盒位点特异性重组。【方法】 PCR分别扩增含氯霉素耐药基因cat的CM片段、含基因盒aadA5的LacA5片段、含整合子重组位点attI1及强可变区启动子的PcS片段和插入位点两侧的同源臂，重叠延伸聚合酶链反应连接上述5个片段制备整合子模型插入片段，通过同源重组将构建好的整合子模型片段插入大肠埃希菌JM109染色Tubastatin A小鼠体中。转入高表达第1类整合酶的质粒pHSint，在链霉素平板上筛选发生整合的菌株，并经聚合酶链反应和测序验证。【结果】构建的整合子模型片段经测序与预期一致，整合子模型片段成功插入大肠埃希菌JM109染色体中。转入高表达整合酶的质粒pHSint后，在链霉素平板上成功筛选出基因盒aadA5发生整合的菌株，经聚合酶链反应扩增并测序与预期一致。【结论】在大肠埃希菌染GSK2399872A浓度色体上成功构建第1类整合酶介导基因盒位点特异性重组反应模型，为进一步揭示整合子捕获耐药性基因盒的反应机制奠定基础。
该研究构建植物表达载体pBin438-Vip3A,通过农杆菌介导法转化棉花品种‘冀合713’,将新型抗虫基因Vip3A导入到棉花植株,创制对棉铃虫抗性的转基因棉花新种质。结果表明 (1)PCR检测Vip3A基因已经导入到棉花基因组中且抑制剂能够稳定遗传。(2)室内抗虫性鉴定表明,与对照相比转基因植株对棉铃虫的抗性显著提高,并获得2株高抗和3株抗棉铃虫的转Vip3A基因株系。(3)Southern blotting结果显示,转基因株系BV01为单拷贝。(4)Elisa检测表明,外源Vip3A基因在BV01的根、茎、叶、花、种子中都有表达,在叶片中的Vip3A蛋白表达为苗期>蕾期>花期>铃期>吐絮期。该研究创制了新型抗虫转基因棉花材料,为培育棉花新型抗虫品种提供了种质资源。